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單克隆抗體技術原理
點擊次數:142 發布時間:2019-04-16

導讀:單克隆抗體是指一個B淋巴細胞雜交瘤細胞所形成的,產生只針對一個抗原決定簇的純抗體。
   B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去,因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力,又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力,將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的價、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。

制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細胞變異株與脾臟的B細胞融合。采用HAT選擇性培養基(培養基中加次黃嘌呤HyPoxanthineH,氨基喋呤AminoopterinA及胸腺嘧啶核苷ThymidineT),在這種選擇性培養基中,由于變異的瘤細胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶或胸腺嘧啶核苷激酶,所以不能利用培養基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺與尿核苷酸單磷酸合成DNA,這一途徑又被氨基喋呤所阻斷,所以未融合的瘤細胞不可避免也要死亡。融合的雜交瘤細胞由于脾淋巴細胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶,可以通過次黃嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻斷,因此雜交瘤細胞大量繁殖而被篩選出來。B淋巴細胞在一般培養基中不能長期生長,一般于二周內均死亡。

單克隆抗體與常規抗體相比有如下優點:①單一特異性,與一個抗原決定簇反應;②可重復性,能夠提供完全一樣的抗體制劑;③一經制出,可無限量地供應;④生產單克隆抗體,不一定需要純的抗原;⑤能查出混合物中存在的用常規方法查不出的少量成分。

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