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“上海恒遠”文獻:β-胡蘿卜素對高糖誘導的 血管內皮細胞損傷的?;ぷ饔?/strong>

點擊次數:132 發布時間:2019/4/3
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邱模昌,蔡靈卿, ,劉建明,程暢

江西醫學高等專科學校藥學系,江西  上饒334000

 

摘要目的     研究β胡蘿卜素β對高糖誘導的內皮細胞損傷的?;ぷ饔?/span>,并初步探討其作用機制。方法     血管內皮細胞長至80% 以上融合時,將其分為正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β ,每組 個復。正常對照組加入10% 葡萄糖注射液5.5 ·-1 ,高糖損傷組加入10% 葡萄糖注射液33 ·-1 ,、

中和高劑量β 組分別加入βC10、20、40μ·-1 +10% 葡萄糖注射液33 ·-1 。各組放置5%CO 養箱中培養48,收集細胞或培養液進行實驗。使用酶聯免疫檢測儀、采用  MTT 比色法檢測 組血管內皮細

胞存活率,采用流式細胞儀檢測血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中活性氧ROS水平,使用全自動生化儀、用乳酸丙酮酸連續監測法檢測組血管內皮細胞培養液中乳酸脫氫酶LDH活性,使用全自動生化儀、采用硫代巴比妥酸比色定量法檢測組血管內皮細胞培養液中丙二醛MDA的水平;先參照   NO 檢測試劑盒的使用說明書進行實驗,后采用酶聯免疫檢測儀檢測組血管內皮細胞培養液中 NO 水平。結果 與正常對照組比較,高糖損傷組的血管內皮細胞存活率、血管內皮細胞培養液中 NO 水平均明顯降低,血管內皮細胞培養液中 LDH 活性、

MDA 水平,血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中 ROS水平均明顯升高 0.01);與高糖損傷組比較,、劑量β 組的血管內皮細胞存活率、血管內皮細胞培養液中 NO 水平均明顯升高,血管內皮細胞培養液中 LDH 、MDA 水平及低、中和高劑量β 組的血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中 ROS水平均明顯降低0.05

0.01。結論    β胡蘿卜素對高糖誘導的臍靜脈內皮細胞的損傷具有?;ぷ饔?/span>,其機制可能與增加 NO 水平和

促進 ROS的降解有關。

關鍵詞糖尿病;β胡蘿卜素;高糖;血管內皮細胞損傷;活性氧;臍靜脈;?;ぷ饔?/span>

中圖分類號R96;R587.1      文獻標志碼       文章編號2095-4727201407-0024-05

 

β胡蘿卜素βen,β是常見類胡蘿卜素之一,類胡蘿卜素呈現很強的抗氧化性,具有清除

自由基、?;ぱ?/span>、抗腫瘤、護膚、增強免疫功能及保護神經系統等作用。有研究發現,β 能充分提

NO 的水平和生物利用度,舒張血管,?;ぱ?/span>,

同時β還能抑制 ROS水平的升高,保持機體抗氧化能力和不斷產生的氧自由基的氧化能力之間的動態平衡,預防動脈粥樣硬化等的發生,β對高糖

誘導的血管內皮細胞損傷的?;ばвδ殼把芯拷?/span>

。本研究觀察了β對血管內皮細胞損傷的?;?/span>效應,并從 ROSNO 途徑探討β對血管內皮細胞損傷的?;ばв?/span>。

 

香港赛马会获奖名单:材料與方法

1.1  實驗材料

人臍靜脈內皮細胞株 HUVEC19 購自中南大源自 ATCC 細胞庫,DMEM 培養基上海恒遠生物科技有限公司,MTT 溶液、 、

LDMSO、     LDH       

MDA試劑盒海門市碧云天生物技術研究所,

沙長錦應用技術研究所,652 酶聯免疫檢測儀BIORAD 公司,DXC600全自動生化分析儀  公司,FACSCALIBUR 流式細胞儀

美國BD 公司。

1.2  實驗方法

1.2.1  血管內皮細胞培養與實驗分組、加藥方法

將人臍靜脈內皮細胞株 HUVEC19 傳代至代后用20%DMEM10% 胎牛血清懸浮細,計數后以5×10孔的細胞數接種于六孔板培養板中, 細胞長至 80% 以上融合時進行實驗。

在血管內皮細胞長至80% 以上融合時,將其分為

正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β,每組個復孔。正常對照組加入10% 葡萄糖注射液5.5 ·-1,高糖損傷組加入10% 葡萄糖注射液33 ·-1,、中和高劑量β 組分別加入βC10、20、40μ·-1+10%葡萄糖注射液33 ·-1。各組放置5%CO  培養箱中培養48,收集細胞或培養液進行實驗。將傳代至代的血管內皮細胞分為正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β。

1.2.2  血管內皮細胞存活率的檢測

傳 代至第 代的血管內皮細胞20%DMEM10%胎牛血清懸浮細胞后,以每孔10         96      , 200μ,每組接種 個復孔。待細胞貼壁后 加藥,正常 對照組、高 糖損傷組及低、中 和高劑量β組加藥同1.2.1 。加藥后,放置5%CO 培養箱中培養24。培養24,每孔加入 MTT 溶液·-1 15μ,再放置 5%CO  培養箱中培養4h。培養4h,小心吸棄孔內培養上清液。

 

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